目的 利用 CRISPR/ Cas9 基因編輯技術構建糖原貯積癥 0(GSD0)型斑馬魚疾病模型,研究該病的發病進程和機制。
方法 針對 gys1 和 gys2 基因各設計一個靶點,進行基因編輯和突變體篩選;利用 qPCR 技術檢測早期發育階段和成魚不同組織基因表達情況,通過 PAS 染色技術檢測糖原累積情況。
結果 獲得了 gys1 和 gys2 基因各兩種有效突變類型的 F2 純合突變體,成功構建了 GSD0 型斑馬魚疾病模型。 gys1- / -純合子 F3 早期胚胎發育遲緩,48 hpf 內全部死亡,而 gys2- / -純合子發育正常。 基因表達分析顯示,野生型斑馬魚早期發育階段(0 ~ 125 hpf),gys1 和 gys2 的表達先下降后上升,受精卵時期表達最高;成魚階段,gys1 在心臟和肌肉組織中高表達, gys2 在肝中高表達。 PAS 糖原染色顯示,與野生型相比,gys1- / -心臟和肌肉沒有明顯的糖原積累,gys2- / -肝沒有明顯的糖原積累。
結論 gys1和gys2基因敲除斑馬魚模型的表型與小鼠模型相似,但也存在差異;Gys1敲除小鼠模型中 F2 大部分純合子死亡,斑馬魚gys1-/-純合子F2正常生長發育,而自交產生的F3不能存活。 斑馬魚 gys1 和 gys2 敲除突變體的制備,為進一步研究人類糖原儲存障礙GSD0的發病進程和機制提供了材料。
閱讀原文：糖原貯積癥0型斑馬魚疾病模型的構建及表型分析.pdf
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