膿毒癥動物模型構建方法總結
膿毒癥:
是一種嚴重的全身性炎癥反應綜合征,是由感染引起的機體免疫系統過度激活和炎癥反應失控的疾病。免疫系統反應過于激烈,導致炎癥反應泛濫,從而引發全身性炎癥反應綜合征。
常見膿毒癥造模方法:
1.細菌感染:通過注射細菌或其產生的細菌毒素來誘導膿毒癥模型。常用的細菌包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2.LPS誘導:脂多糖(LPS)是細菌外膜中的主要成分,具有強烈的免疫激活作用。可以通過注射LPS來誘導炎癥反應和膿毒癥模型。常用的給藥途徑包括靜脈注射、腹腔注射或氣道暴露。
3.盲腸結扎穿刺(CLP):腹膜炎攻擊方法的一種,主要是通過手術方式將小鼠自身盲腸內容物釋放到腹腔造成感染,從而構建膿毒癥模型。
造模方法步驟
一、.盲腸結扎穿刺法(CLP):
1.實驗開始前禁食不禁水12h,小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉,待小鼠完全麻醉后仰臥位固定。
2.對腹部噴酒精和碘伏消毒,去除腹部表面毛發,使用手術刀在腹壁切2cm切口,暴露盲腸,在回盲瓣遠端結扎盲腸,然后用針刺穿刺盲腸2次,輕輕擠壓盲腸,使少量的腸內容物滲出,將盲腸復位,縫合腹膜和皮膚。
3.小鼠正常飼養6h后皮下注射30ml/kg生理鹽水和30mg/kg的頭孢曲松。
二、LPS誘導法 :
1.大鼠用卵圓鑷夾住其頸背部皮膚令其懸空,下腹部消毒。
2.緩慢腹腔注射內毒素(大腸桿菌脂多糖,LPS,8-10 mg/kg,即230-250g的大鼠,每只注射2-2.5mg,約存活5-7天)制成大鼠膿毒癥模型。
3.造模后大鼠出現精神倦怠,躁動,呼吸、心率加快,腹脹,口鼻腔分泌物增多,豎毛,直腸溫度變化超過1℃等表現則視為造模成功。
結果案例
HE染色鏡下可見control組腸絨毛形態結構完整,未見出血
LPS組腸黏膜固有層下出血嚴重,可見炎細胞浸潤
IL-9組腸黏膜固有層下出血嚴重,肌層可見炎細胞浸潤