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實驗動物的個體標識技術


在生產和實驗中,為區別動物的不同個體或不同組別,需采用相應的動物標識方法,理想的標識方法必須符合標記明確易辨認,對動物損傷小且操作簡單的基本原則,可能的情況下盡量不采取將標記做在動物身上的方法。群養的動物可以按其特有毛色、花紋進行識別,如猴、犬常通過照片和文字記錄其外表和毛色特征,單籠飼養的動物可在籠上掛牌標注。當這些方法不能滿足實驗要求時,可采用以下方法對動物進行標記。

一、非損傷性標識技術

(一)染色法

染色標識是用化學染色劑在動物體表明顯部位涂染的方法,操作簡便,對動物損傷小,是實驗室最常用的方法,適用于白色或淺色的動物,尤其適合小動物,白色或者淺色無花紋的小鼠、大鼠、豚鼠、兔均可采用。由于染色標記可自行褪色,長期實驗中需要定期復染。染色標記也可因為動物間的摩擦、舔毛、尿液或水浸漬、被毛脫落等原因而破壞,因此需要經常檢查,及時復染。此外,需注意動物會試圖舔干被染的被毛,因此攝入少量染色液,可能對動物的健康和實驗觀察有潛在影響,如可以看到攝入苦味酸的小鼠血清顏色變深。

1.標識規則  10以內的編號可使用一種染色液在不同部位涂染,100以內的編號需使用兩種不同顏色的染色液進行涂染,一種顏色代表十位數,另一種顏色代表個位數。涂染規則如圖3-1-40所示。

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2.染色操作  用毛筆(或以鑷子裹上棉花代替)蘸取適量染色液,逆毛涂刷。由于動物被毛生長有一定方向,逆毛涂刷可將被毛從毛根至毛尖全部染色,順毛時僅在毛尖染色且染色液容易到處流淌。染色后待被毛稍干再放開動物。

如無染色液,也可用油性記號筆進行臨時性標記,大鼠和小鼠可在尾部用不同的比劃代表數字(圖3-1-41),該標記僅維持2~3天。兔和豚鼠可在耳部皮膚直接書寫編號。

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3.常用染色液  3%~5%苦味酸溶液,涂染成黃色;將苦味酸溶于無水乙醇制成飽和苦味酸乙醇溶液,乙醇易揮發,染色時可避免染色液流淌。

2%硝酸銀溶液,涂染成咖啡色,涂后需光照10分鐘。

0.5%中性紅或品紅溶液,涂染成紅色。

煤焦油乙醇溶液,涂染成黑色。

龍膽紫溶液,涂染成紫色。

(二)剪毛法

剪毛標識是在動物體表相應部位剪去被毛的標識方法,操作簡便,不損傷動物,標記也容易辨識。但由于動物的被毛不斷長出而使標記逐漸消失,因此只適合短期研究。小鼠、大鼠、豚鼠之類的小型嚙齒類可按單色涂染標記的規則剪毛,犬、兔等大、中型動物還可用剪毛刀在動物體側或背部剪出號碼。

(三)掛牌法

掛牌標識是讓動物佩戴印有編號的號牌進行標識的方法,號牌法不受動物毛色的影響,但多用于體型較大和佩戴項圈的實驗動物如犬、兔等。可將號碼牌固定在動物的項圈上,或者干脆在頸圈上印編號。號牌材質可為塑料、金屬(不銹鋼或者鋁質)等,應不生銹且不易損壞。禽類的編號可以采用掛腿圈法,首先將號碼沖壓在圓形或方形金屬牌上,金屬牌常用不生銹的鋁板制成,或者可使用市售的打好號碼和記號的鋁制牌。然后將金屬薄片固定在拴腿的皮帶圈上,將此圈固定在動物的腿的上部。

二、損傷性標識技術

(一)耳標法

耳標即在動物的耳郭上所做的個體標識,其中耳孔標識是用專用的耳部打孔機在動物耳部打孔的標識方法,耳缺標識是用剪刀在耳緣剪出缺口的標識方法,動物的編號由耳孔或者耳缺的位置和數量來表示。該方法所作標記可終身保持,清晰且容易辨認,不受動物毛色的限制,但操作時會引起動物的疼痛以及造成一定程度的損傷,也可能會影響耳靜脈注射之類的實驗操作。由于小鼠耳殼大而薄,容易操作,打孔或者剪耳后幾乎不出血,且很少在其耳上進行實驗操作,故該方法常用于黑色、棕色小鼠以及裸鼠等不能使用剪毛或者染色進行標記的小鼠。豬體表被毛稀疏,不能采用染色和剪毛,也常用此法進行標識。耳孔或耳缺標記的缺點是不易記憶,不夠直觀。

1.標識規則  可參考圖3-1-42,也可按照實驗實際情況在表3-1-12的基礎上進行變通。

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2.標記操作  見圖3-1-43。打孔或剪耳時可適當進行局部麻醉以減輕對動物的刺激,做好標記部位的消毒和止血,將滑石粉涂抹在傷口上可防止傷口愈合標記消失。

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此外,對于體型較小的動物如嚙齒類,有時也將號牌懸掛在耳上,如圖3-1-44。掛號牌的過程視方法的不同而對動物產生不同程度的損傷,且動物可能因不適而設法自行去除號牌,耳部懸掛標簽也可能妨礙動物的日常活動與交流。

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(二)刺染法

刺染(tattoo)標識是在表皮針刺后涂以顏料,使其滲入皮下形成永久的記號,根據使用工具和操作方法的不同又稱為刺號、刺青、打號、刺印、針刺等。刺染適用于各種毛色的動物,并且能夠用于幼齡小鼠標記而取代剪趾法。

1.標記部位  大鼠、小鼠和豚鼠等小動物,可在尾部、耳部或四肢皮膚裸露處進行標記,僅刺出記號即可,兔和耳朵比較大的犬可在耳部標記,可以使用刺號鉗刺出號碼再染色,猴可在胸部裸露皮膚處標記。

2.標記操作  見圖3-1-45和圖3-1-46。針刺時應避開大血管,預先對皮膚消毒,將表皮刺出血即可,不能刺入太深,刺后將染料涂抹于表皮,待染料滲入后再擦干凈皮膚。

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(三)剪趾法

剪趾標識是剪去動物特定腳趾第一趾節,使之形成永久缺失而成為個體標志(圖3-1-47)。由于剪趾對動物福利影響較大,故非不得已不推薦使用,且只限于初生或幼齡動物。剪趾法目前多用于轉基因小鼠的個體識別,因轉基因小鼠在出生后需逐個進行基因型鑒定,但此時被毛尚未長出,耳殼也不夠大,不能進行染色標記和耳孔/耳缺標記。對小鼠剪趾應在14日齡以內進行,在1周齡內剪趾無需麻醉,但出生第2周實施應進行麻醉。剪趾可以在不同毛色小鼠進行,如剪趾得當,標記可留存終身。剪趾時需合理掌握腳趾剪去的程度,剪趾過少,腳趾愈合后標記不易辨認,剪趾過多則容易使動物失血過多。剪趾標記的同時,可以將剪下的腳趾用于基因型鑒定,從而不用再從尾尖切取組織,減少了對動物的損傷。剪趾后應注意止血。

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(四)電子芯片法

電子芯片法是在動物皮下埋植電子芯片進行永久標識的方法(圖3-1-48)。每個微芯片具有獨一無二的編號,工作人員通過專用的便攜式微芯片掃描儀讀出芯片上的信息進行識別,由于微芯片可以攜帶大量信息,可以將該動物的有關信息如來源、遺傳背景、出生日期等都載入芯片。目前芯片法由于成本較高而尚未普及,僅用于獼猴等價值高的實驗動物。

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