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概述:DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表 達(dá)。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。
概述:在人類基因組中,估計(jì)平均每1,000 個(gè)堿基對(duì)就有1 個(gè)SNP,估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300 多萬個(gè)。SNP 分布不均勻,在非轉(zhuǎn)錄序列中要多于轉(zhuǎn)錄序列,絕大多數(shù)位于蛋白的非編碼區(qū)。通常情況下是一種二等位基因的變異,多為轉(zhuǎn)換,即一種嘧啶堿基換為另一種嘧啶堿基,或一種嘌呤堿基換為另一種嘌呤堿基,轉(zhuǎn)換與顛換之比為2:1。SNP 在CG 序列上出現(xiàn)最為頻繁,而且多是C→T,因?yàn)镃G 中C 即胞嘧啶常被甲基化,自發(fā)脫氨后即變?yōu)樾叵汆奏ぁ?/p>
概述:盡管化學(xué)合成是最貴的方法,但是卻是最方便的一種方法。其主要的缺點(diǎn)包括價(jià)格高,定制周期長(zhǎng),特別是有特殊需求的。由于價(jià)格比其他方法高,為一個(gè)基因合成3—4對(duì)siRNAs 的成本就更高了,比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進(jìn)行化學(xué)合成。
概述:microRNA參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控活動(dòng),其中多數(shù)miRNA具有高度序列保守性、表達(dá)時(shí)序性和組織特異性。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑,包括發(fā)育、病毒防御、造血過程、器官形成、細(xì)胞增殖和凋亡、脂肪代謝等,具有重要的基因表達(dá)調(diào)控作用。
概述:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線(內(nèi)參)對(duì)未知模板(待測(cè)樣品)進(jìn)行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR擴(kuò)增過程中,通過熒光信號(hào),對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系,所以成為定量的依據(jù)。
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