電鏡樣本取材在進(jìn)行超薄切片技術(shù)中是非常重要的一步，但是有些具體的臟器取材，可以有不同的取材方法。所以，有些研究者經(jīng)常采用主動(dòng)脈灌注固定方法或者局部灌注法，這種固定方法最好。
可是，由于此種方法操作比較復(fù)雜而難以實(shí)施，如果研究的臟器比較多如心肝肺腎腦胃腸等，不采取灌注固定，想將各個(gè)臟器取材都符合要求是很難的。由此而造成因取材失誤導(dǎo)致觀察失敗是非常令人痛心的事情。大部分的動(dòng)物是需要采血后進(jìn)行電鏡樣本取材的，而這些樣本取材共同之處是動(dòng)物徹底放血致死后，缺血缺氧改變非常嚴(yán)重，從而無(wú)法作出電鏡觀察分析。
解決方案
為了避免各臟器長(zhǎng)時(shí)間缺血缺氧現(xiàn)象，可以在動(dòng)物麻醉下行各臟器主要血供血管結(jié)扎，利用扎一個(gè)取一個(gè)的方法。其他未取材的臟器可以保持血流，心臟、中樞神經(jīng)、肺在最后取材。如有可能，應(yīng)在采血前取材，確實(shí)有困難，可安排實(shí)驗(yàn)組人員專門(mén)取幾只動(dòng)物作為電鏡觀察。
01、腦組織取材法
在一般情況下，腦組織先進(jìn)行灌注固定（4％多聚甲醛溶液），待固定完成后應(yīng)馬上打開(kāi)顱骨，暴露出所要取材的位置，根據(jù)取材的要求以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康母钊∠鄳?yīng)的部位。如研究腦神經(jīng)軸索、髓鞘以及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，建議取材于腦組織白質(zhì)部分，此處有髓神經(jīng)纖維相對(duì)較多，膠質(zhì)細(xì)胞比較豐富。
如要研究神經(jīng)元以及血腦屏障結(jié)構(gòu)，建議取材于腦皮質(zhì)的灰質(zhì)部分，而且最好做定向包埋，以神經(jīng)元長(zhǎng)軸方向（大約為腦組織的矢狀面）作為切面方向，這樣可以很好地觀察神經(jīng)元細(xì)胞核、軸突以及樹(shù)突結(jié)構(gòu)的變化，突觸以及毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)也比較容易見(jiàn)到。
02、睪丸及附睪組織取材法
由于睪丸組織比較松軟，固定難度較大，目前大多采取灌注固定法進(jìn)行固定。但此方法如果處理不當(dāng)，很可能會(huì)造成固定不良，原因是睪丸的血供離心臟比較遠(yuǎn)，固定液難以到達(dá)，睪丸曲細(xì)精管基膜比較厚，固定液難以滲透，導(dǎo)致固定不良。
另外，我們還可以采用注射固定法即用注射針直接插入睪丸內(nèi)部，從多個(gè)方向進(jìn)行注射固定液，然后割取觀察部位進(jìn)行進(jìn)一步浸泡固定。還有一種方法就是直接割取觀察部位進(jìn)行浸泡固定。需要注意的是，取材的睪丸組織必須切很細(xì)，讓固定液直接滲透入曲細(xì)精管的斷面。各層生殖細(xì)胞都會(huì)得到很好的固定，此法相對(duì)麻煩，每次操作后都要離心處理。
另外需要注意觀察生精細(xì)胞，必須取材于睪丸的睪丸網(wǎng)部位，如果取材于直精小管部位，就看不到生精細(xì)胞。大鼠與小鼠的睪丸網(wǎng)比較表淺，在白膜下附近。如果要觀察成熟精子，最好取材于附睪的尾部，此處精子已基本成熟，而且精子密度最高。
03、肺組織取材法
大家一定會(huì)覺(jué)得肺組織取材比較困難，因?yàn)榉谓M織內(nèi)部氣體無(wú)法徹底排放而導(dǎo)致組織懸浮于固定液表面，使得固定液不能及時(shí)滲透進(jìn)組織內(nèi)部而導(dǎo)致大部分組織固定不良或無(wú)法固定。
目前提倡的是主動(dòng)脈灌注固定。如果條件不成熟，可采取浸泡固定。組織取出后盡量切小，同時(shí)利用震蕩的方法將組織沉入固定液中。另一種方法就是將組織放在載玻片上，并將固定液滴在其上，用另外一片載玻片輕輕壓在上面并輕輕擠壓，一壓一松，可以看到固定液內(nèi)有小氣泡溢出，直到小氣泡消失為止，但必須注意力度不能太大，否則，組織的細(xì)胞將會(huì)被破壞。
需要注意的是，在固定之前，取材者必須清楚自己的研究目的，從而采取相應(yīng)部位進(jìn)行取材。如果以研究支氣管黏膜為主的（這里指肺內(nèi)的支氣管），盡量取材于靠近肺門(mén)部位，這里有具有軟骨的大支氣管，在肺葉的內(nèi)側(cè)1/2部分，有小支氣管、細(xì)支氣管以及終末細(xì)支氣管。如果主要研究肺泡上皮細(xì)胞、終末細(xì)支氣管、呼吸性細(xì)支氣管以及肺泡隔的結(jié)構(gòu)等，建議取材于肺葉靠近胸膜一側(cè)或者肺尖部。如果研究肺動(dòng)脈內(nèi)皮或壁的結(jié)構(gòu)，建議取材于肺門(mén)附近的肺葉組織，這里的大小動(dòng)脈數(shù)量比較多，而遠(yuǎn)側(cè)肺呼吸部的動(dòng)脈極少。
04、腎組織取材法
腎外包被一層薄膜，主要由纖維組織和少量平滑肌組成。一般腎標(biāo)本取材部位在腎實(shí)質(zhì)，實(shí)質(zhì)由皮質(zhì)與髓質(zhì)兩部分組成，一般取材部位在腎皮質(zhì)，皮質(zhì)位于腎的外周，其厚度因動(dòng)物種類不同而有差異，一般在1mm~4mm。腎組織除了采取灌注固定外，直接浸泡固定的效果也是比較滿意。腎組織取材相對(duì)比較簡(jiǎn)單，一般臨床上均采用穿刺術(shù)，然后根據(jù)需要切取皮質(zhì)或髓質(zhì)進(jìn)行觀察。動(dòng)物腎組織取材要注意的是，一要取材位置選擇在腎的上極，二要準(zhǔn)確判定皮質(zhì)與髓質(zhì)的位置，如果是皮質(zhì)部位，只要將包膜分離后，將腎最外層組織取下來(lái)即可，這里一般都會(huì)有腎小球存在。
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